Проба крови: что это такое, описание и особенности

Что входит в биохимический анализ крови

Содержание:

БАК или Биохимический анализ крови – это высокоинформативный метод лабораторный диагностики, способный дать общую картину состояния пациента для оценки работы всех внутренних органов и обмена веществ. Расшифровка биохимии позволяет врачу определить точную причину болезни и назначить правильное лечение.

Показания к проведению биохимического анализа крови

Исследование проводится на первой стадии диагностики любых соматических заболеваний любого профиля. Обязательным направление пациента на биохимию крови является при следующих жалобах и симптомах:

  • Регулярные сбои в работе пищеварения (тошнота, рвота, тяжесть в животе, вздутие, метеоризм, диарея или запор, изжога, неприятные ощущения в подреберье);
  • Устойчивые боли любой локализации (головные, мышечные, суставные, в области внутренних органов);
  • Дыхательные нарушения (непроходящий кашель, одышка, спазмы);
  • Сигналы от нервной системы (тремор конечностей, хроническая усталость, бессонница, головокружения и обмороки);
  • Сбои в работе мочеполовой системы (изменение запаха и цвета мочи, изменения частоты мочеиспускания, неприятные ощущения в процессе);
  • Сигналы со стороны сердечнососудистой системы (учащенное или редкое сердцебиение, высокое или низкое артериальное давление);
  • Слабость иммунитета, которая выражается в частых и долго не проходящих респираторных заболеваниях;
  • Патологические изменения кожных покровов и наличие на теле видимых опухолей;
  • Признаки эндокринных нарушений (непроходящая жажда или голод, резкое изменение веса, постоянное ощущение жара или холода).

Как проводится забор крови на биохимический анализ

Исследуемый материал (до 5мл) для биохимии берется из локтевой вены. Венозная кровь несет в себе больше информации, т.к. проходит через все ткани организма и меняет свой состав в процессе циркуляции. Пробирку с кровью отправляют в лабораторию, где в специальном аппарате – биохимическом анализаторе – производится обширный анализ.

Как подготовиться к сдаче крови на «биохимию»?

Чтобы результаты были максимально точными, необходимо соблюдать правила подготовки к анализу крови на биохимическое исследование:

  • За двое суток перейти к щадящему рациону – исключить жирные, сладкие, острые, соленые, копченые блюда, а также отказаться от алкоголя, кофе и крепкого чая;
  • Накануне воздерживаться от любых стрессовых для организма процедур и мероприятий – бани и сауны, контрастного душа, тяжелых физических нагрузок;
  • Если идет курс приема медикаментов, обсудить с лечащим врачом, не повлияют ли они на результаты анализа;
  • За 6-12 часов до БАК нельзя принимать какую-либо пищу и курить. Пить разрешается только простую воду.

Расшифровка и данные нормальных показателей

Результатом анализа является заключение, которое как правило представляет собой таблицу о содержании химических веществ и биологических агентов в крови. В первой колонке указан показатель, во второй – выявленное значение, в третьей — диапазон нормы. Только специалист, оценивая показатели, может определить наличие нарушений в водно-солевом обмене, выявить воспалительные процессы и инфекции, а также оценить состояние работоспособности всех органов пациента.

Что касается нормальных показателей, то данные для взрослых выглядят так:

Анализ Мужчины Женщины
Общий белок 64-84 г/л. 64-84 г/л.
Гемоглобин 130-160 г/л 120-150 г/л.
Гаптоглобин 150-2000 мг/л 150-2000 мг/л
Глюкоза 3,30-5,50 ммоль/л. 3,30-5,50 ммоль/л.
Мочевина 2,5-8,3 ммоль/л. 2,5-8,3 ммоль/л.
Креатинин 62-115 мкмоль/л 53-97 мкмоль/л.
Холестерин 3,5-6,5 ммоль/л. 3,5-6,5 ммоль/л.
Билирубин 5-20 мкмоль/л. 5-20 мкмоль/л.
АлАТ (АЛТ) до 45 ед/л. до 31 ед/л.
АсАТ (АСТ) до 45 ед/л. до 31 ед/л.
Липаза 0-190 ед/л. 0-190 ед/л.
Альфа-амилаза 28-100 ед/л. 28-100 ед/л.
Панкреатическая амилаза 0-50 ед/л. 0-50 ед/л.

Расшифровка основных показателей БАК

Общий белок. Биохимическое исследование крови определяет суммарную концентрацию различных белков, которые состоят из аминокислот. Белок принимает активное участие процессах свертывании, переработки и транспортировки питательных веществ в органы и ткани.

Гемоглобин. Этот специфический белок из системы эритроцитов отвечает за перемещения кислорода в организме

Гаптоглобин. Белок плазмы крови, который связывает гемоглобин и отвечает за сохранение железа в организме. Также участвует в контроле местных воспалительных процессов.

Глюкоза. Важный компонент, который отвечает за углеводный обмен. Ее содержание в артериальной крови всего выше, чем в венозной.

Мочевина. Этот основной продукт распада белков, в которой ненужный организму азот удаляется с мочой.

Креатинин. Это, как и мочевина, конечный продукт белкового обмена. Содержание креатинина в крови зависит от пола, возраста, мышечной массы.

Холестерин. Компонент жирового обмена, который также участвует при построении мембраны клетки и синтезе витамина D и половых гормонов. Другое название – холестерол. Различают – общий холестерин, холестерин липопротеинов с низкой плотностью (ЛПНП) и высокой плотностью (ЛПВП).

Билирубин. Продукт распада гемоглобина, токсичное вещество двух видов: прямой и не прямой. Они образуют «общий» и норма при расшифровки биохимического исследования крови указывается именно для него.

АлАТ (АЛТ). Аланинаминотрансфераза – это фермент содержат клетки печени, почек и сердца, поэтому его наличие в крови говорит о разрушении клеток этих органов.

АсАТ (АСТ). Аспартатаминотрансфераза — клеточные ферменты, которые участвуют при обмене аминокислот и содержатся в клетках печени сердца и почек.

Липаза. Фермент, способствующий расщеплению жиров.

Амилаза. Она занимается расщеплением углеводов из пищи и обеспечивает их переваривание. Различают альфа-амилазу (диастазу) и панкреатическую амилазу.

Важно помнить, что оценить результаты исследования крови, расшифровать биохимический анализ, поставить диагноз и назначить лечение может только специалист!

Где сдать кровь на биохимию в СВАО

Сдать кровь для биохимического анализа, вы можете в любой клинике, которая имеет лабораторию и необходимые инструменты для проведения исследования. «Поликлиника «ПрофиМед» в двух шагах от метро Отрадное (Москва, СВАО) с 2008 года работает в сфере частных медицинских услуг и имеет собственную лабораторию и штат высококвалифицированных специалистов.

Читайте также:
Право публичное: что это такое, описание и особенности

Клинический анализ крови. Общая информация

Клинический анализ крови означает подсчет количества клеток в образце венозной крови. Капиллярная кровь не является рекомендуемой средой исследования для подсчета клеток, однако исследование гемограммы часто выполняют из образца капиллярной крови в отделениях интенсивной терапии.

Определение лейкоцитарной формулы, исследование среднего размера эритроцитов, тромбоцитов, определение количества предшественников эритроцитов (ретикулоцитов) и степени их зрелости, оценка скорости оседания эритроцитов и т.д., все это входит в понятие «клинический анализ крови».

Клинический анализ крови выполняется как первое скрининговое исследование при обращении и жалобах пациента на недомогание. Может быть выполнен сокращенный клинический анализ крови, так называемая «тройка» – подсчет количества эритроцитов, лейкоцитов и определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ). Сокращенный клинический анализ крови малоинформативен, т.к. может охарактеризовать только выраженные патологические процессы.

Более целесообразно из того же объема образца крови выполнить развернутую гемограмму: подсчет количества эритроцитов с оценкой их среднего размера (MCV), подсчет общего количества лейкоцитов и оценку лейкоцитарной формулы (подсчет нейтрофилов, базофилов, эозинофилов, моноцитов, лимфоцитов), подсчет количества тромбоцитов и оценку среднего размера тромбоцита (MPV), ретикулоцитов и их среднего размера (MRV), степени зрелости ретикулоцитов (IRF).

Многочисленные характеристики клеток в настоящее время могут быть получены в автоматическом режиме в течение 3-5 минут после взятия крови. На основании развернутого исследования гемограммы может быть сделано не только заключение о наличии воспалительной реакции, анемии, но и характере других патологических процессов, возможной перенесенной или продолжающейся кровопотере, дефиците не только железа, но и витамина В12, фолиевой кислоты.

Показания к исследованию

  • Скрининговое обследование при профилактическом осмотре, диспансеризации;
  • первичное обследование при госпитализации;
  • диагностика анемий;
  • диагностика болезней системы кроветворения;
  • инфекционные заболевания;
  • воспалительные процессы;
  • гемато-онкологические заболевания;
  • контроль эффективности терапии.

Метод исследования

Метод исследования зависит от требуемых параметров гемограммы.

В ручном режиме, из образца крови (3–5 мл) часть отбирается в капилляр для определения СОЭ, часть образца крови используется для определения гемоглобина, капля крови – для приготовления мазка и дальнейшего подсчета лейкоцитарной формулы. Отдельное количество крови требуется для приготовления мазка и подсчета тромбоцитов, а также часть образца крови необходима для исследования количества эритроцитов и отдельно – ретикулоцитов. В ручном режиме, при необходимости окраски и визуальной оценки мазка, результат развернутой гемограммы пациента в многокоечном стационаре, может быть получен в конце рабочего дня или позднее.

В условиях автоматизированного подсчета клеток и оценки различных популяций требуется от 150 до 300 мкл крови и 100 мкл для определения СОЭ. Исследование в автоматическом режиме основано на импедансном методе Культера (1956), в основе которого лежит принцип замыкания электрической цепи каждой клеткой, последовательно проходящей через апертуру пробоотборника. В последующем метод автоматизированного подсчета получил ряд усовершенствований, в современных анализаторах каждая клетка оценивается по нескольким параметрам: проводимости, светорассеиванию, размеру, наличию на поверхности CD-маркеров, соответственно, принадлежности к различным популяциям. Количество параметров определяется моделью прибора.

Исследование в автоматическом режиме позволяет выявить патологические образцы, которые должны быть пересмотрены визуально специалистом лабораторной диагностики. Визуальный контроль гемограммы предполагает приготовления мазка крови, слайда, что может быть выполнено из капли крови уже взятого образца как в ручном, так и автоматическом режиме. Автоматизированное приготовление мазка крови предпочтительно, т.к. происходит равномерное распределение капли крови и стандартизированное окрашивание. Визуальная микроскопия мазка проводится в пяти полях зрения.

Исследование крови в автоматическом режиме занимает 3–5 минут, если не требуется дополнительное приготовление мазка и исследование СОЭ.

Условия взятия и хранения образца

Клинический анализ крови выполняется из венозной крови, стабилизированной калиевой солью ЭДТА, если не указано иначе в инструкции к анализатору. Взятие крови выполняется натощак. Образец крови должен быть немедленно после взятия перемешан 9 раз осторожным переворачиванием, следует избегать образования пены и резкого встряхивания. До исследования образец крови может храниться при комнатной температуре (23–24 °С) в течение 24 часов в штативе, в вертикальном положении, в удаленном от света месте.

При использовании образца капиллярной крови для клинического анализа необходимо получить свободнотекущие капли капиллярной крови из предварительно прогретой области прокола. Сбор капиллярной крови без сдавливания пальца обеспечивает сохранность клеток. Надавливание области прокола и сбор образца из охлажденной конечности приведут к искажению результатов гемограммы. Образцы капиллярной крови должны быть стабилизированы калиевой солью ЭДТА, поэтому для взятия образца следует использовать капилляры, обработанные K3ЭДТА. Образцы могут храниться при комнатной температуре (23–24 °С) в течение 24 ч в штативе, в вертикальном положении, в удаленном от света месте.

Современные технологии для качественного анализа капиллярной крови

В клинической практике довольно часто возникают ситуации, когда невозможно взять кровь для лабораторных исследований из периферических вен. Это, прежде всего, недоношенные дети и дети первого года жизни, пожилые люди и тучные пациенты, находящиеся в критическом состоянии. Для этого существуют системы, предназначенные для взятия, транспортировки и последующего исследования капиллярной крови. Наибольший спектр микропробирок (микротейнеров со встроенным коллектором) для взятия капиллярной крови с тем же спектром реагентов, что и для пробирок, предназначенных для взятия венозной крови (за исключением пробирок для исследования гемостаза), производится компанией «Бектон Дикинсон». Как известно, лабораторное исследование делится на три основных этапа: преаналитический (внелабораторный), аналитический и постаналитический. Аналитический этап непосредственно связан с функцией лаборатории, и он легко контролируется специалистами лабораторий, а использование современных систем для диагностики (автоматические анализаторы, диагностические наборы, контрольные материалы и калибраторы) сводят к минимуму ошибки на лабораторном этапе. Преаналитический этап в наименьшей степени может контролироваться лабораторией, т. к. значительная часть этого этапа осу ществляется сотрудниками лечебных учреждений. И именно с этим этапом связано до 93% ошибок при производстве анализов [5].

Читайте также:
Морское право: что это такое, описание и особенности

Централизованная клинико-диагностическая лаборатория центра «Охраны материнства и детства» выполняет исследования для 40 лечебных учреждений города Красноярска. Поэтому очень остро стоит вопрос правильной подготовки пациентов и взятия биологического материала у детей. Контроль преаналитических факторов является ключевым для обеспечения качественных результатов. За счет снижения числа ошибок на любом этапе преаналитической подготовки можно существенно улучшить качество исследований, снизить количество повторных проб, сократить расходы рабочего времени и средств на обследование пациентов. Немаловажным является психологический и физический дискомфорт пациента, когда встает вопрос о повторном получении биоматериала (дети и беременные женщины).

В ЦКДЛ выполняются исследования для детей амбулаторно-поликлинической службы города, что составляет 43% от всех выполняемых исследований. И 57% выполняется для пациенток женских консультаций города.

Проведенный анализ отбракованных гематологических проб за год позволил оценить частоту возникновения ошибок на преаналитическом этапе. Исследования гемограмм в среднем в месяц составляют 17 500. Для выполнения гематологических исследований мы используем капиллярную и венозную кровь. Гематологические исследования из капиллярной крови мы проводим только у детей, и эта доля составляет 58%, а 42% составляет исследование венозной крови (это дети старшего возраста и женское население). Процент брака при получении капиллярной крови составил 2,2%, при венепункции процент составил 0,7%. Таким образом, процент ошибок при взятии капиллярной крови в три раза выше, чем при взятии венозной. Основные причины низкого качества взятых проб крови: сгустки в пробе и нарушение объема пробы, которое приводит к нарушению соотношения кровь-антикоагулянт (рис. 1).

Рис. 1. Основные причины низкого качества взятых проб крови

Пробы, полученные со сгустками, составили наибольшую долю ошибок как при получении капиллярной, так и при получении венозной крови. Сгустков в капиллярной крови было получено в три раза больше, чем в венозной. Чем можно объяснить данный факт?

  • Контактной активацией свертывания при взятии капиллярной крови;
  • Выходом тканевого тромбопластина при давлении пальца;
  • Относительно длительной по времени процедурой взятия крови;
  • Небольшим объемом пробы и в связи с этим проблематичностью перемешивания;
  • Недостаточным и несвоевременным перемешиванием пробирки.

Венозная кровь считается лучшим материалом для лабораторных исследований. При известной стандартизации процессов взятия, хранения, транспортировки венозной крови удается добиться минимальной травматизации и активации клеток, примеси тканевой жидкости, при этом всегда имеется возможность повторить и/или расширить анализ (например: при низком гемоглобине назначить ретикулоциты) и, как следствие, минимизировать необходимость повторных процедур взятия крови (очень важный фактор для детей) и влияние на правильность и точность результатов.

Взятие капиллярной крови для лабораторных исследований возможно в следующих ситуациях:

  • при ожогах, занимающих большую площадь поверхности тела пациента;
  • при выраженном ожирении пациента;
  • при установленной склонности к венозному тромбозу;
  • у новорожденных;
  • при настойчивом желании родителей.

Анатомическое строение кровеносной системы детей обуславливает необходимость правильно сделать выбор места пункции и медицинского инструментария. В педиатрической практике возможно взятие капиллярной крови из пальца, пятки и в редких случаях из мочки уха. Пункция пальца не должна производиться у младенцев, так как это может привести к повреждению костной ткани. В таком случае подходящим местом прокола для получения образца является пятка у дистальной части пяточной кости. В связи с этим представляется важным использование автоматических ланцетов, гарантирующих низкую травматичность и соблюдение нужной глубины прокола, в зависимости от типа выбранного ланцета. Между объемом получаемой крови и глубиной прокола существует прямая зависимость. В связи с этим тип ланцета должен подбираться в соответствии с местом прокола и объемом получаемого образца. Компания «Бектон Дикинсон» производит одноразовые ланцеты с разным типом прокалывающего устройства: игла или лезвие, а также с разной глубиной прокола. Контактно-активируемые ланцеты BD Microtainer ® c корпусом фиолетового цвета предназначены для получения одной капли крови и гарантируют отсутствие болевого синдрома у пациентов не менее, чем в 90% случаев [2], тогда как ланцеты BD Microtainer ® c корпусом голубого цвета преднзначены для получения до 0,5 мл крови и обеспечивают скорость капиллярного кровотока не менее 2 мкл/с [1]. Для взятия капиллярной крови у новорожденных предпочтение должно отдаваться контактно-активируемым BD Quikheel™ с лезвием, осуществляющим полукруговое режущее движение, что позволяет получить хороший ток крои из ранки не менее, чем в 90% случаев [7].

Учитывая возрастные особенности поведения детей во время процедуры взятия крови (подвижность, эмоциональный стресс и т. д.), следует обратить внимание на последовательность заполнения пробирок. Для корректного забора капиллярной крови начать следует с пробирок с антикоагулянтами (на гематологические исследования), а затем использовать микротейнеры или пробирки для получения сыворотки или плазмы, предназначенной для биохимических, иммунологических и других видов исследований. Так, например, использование пробирки BD Microtainer ® PST™ с корпусом янтарно-желтого цвета гарантирует стабильность образцов плазмы при анализе крови на билирубин не менее 24 часов при комнатной температуре [4]. Необходимо отметить, что исследование гематологических показателей, группы крови, глюкозы и некоторых других биохимических показателей у детей возможно из капиллярной крови, но исследование показателей системы гемостаза, гормонов необходимо проводить только из венозной крови.

Читайте также:
Национальный режим: что это такое, описание и особенности

Отклонения от стандартов при взятии пробы, транспортировке и хранении образца, а также факторы, связанные с пациентом, могут привести к неверным или неточным результатам анализов и, следовательно, к постановке ошибочного диагноза. Мы посмотрели влияние объема полученного образца на результаты исследований. Взятие капиллярной крови производилось одномоментно у одного пациента в микротейнеры с К2ЭДТА и К3ЭДТА разных производителей. Пробы были взяты с учетом рекомендаций производителей и с нарушением объема, как это часто бывает на практике (рис. 2, 3).

Рис. 2. Пробы с К2ЭДТА с метками для взятия 250–500 мкл крови

Рис. 3. Пробы с К3ЭДТА с метками для взятия 500 мкл крови

Избыток ЭДТА, независимо от концентрации, негативно воздействует на эритроциты, вызывая сначала их сморщивание, а затем с течением времени и набухание, что приводит к увеличению среднего объема и уменьшению среднего содержания гемоглобина в одном эритроците. Кроме того, использование К2ЭДТА в пробирках BD Microtainer ® сопровождается отсутствием формирования микросгустков [6], а пробирка BD Microtainer ® МАР с К2ЭДТА, предназначенная специально для автоматических анализаторов капиллярной крови, обеспечивает риск образования микросгустков не более 2% [6] и стабильность гематологических показателей не менее 12 часов при хранении проб при комнатной температуре [3]. При этом выявленные в ходе проведенных нами исследований нарушения наиболее выражены в пробах с КЗЭДТА. Нарушение соотношения кровь-антикоагулянт приводит к набуханию тромбоцитов и их расщеплению, что выражается в увеличении их количества, т. к. образующиеся фрагменты имеют достаточно крупные размеры и могут быть подсчитаны как нормальные кровяные пластинки. Также КЗЭДТА вызывает уменьшение общего количества лейкоцитов и их дегенеративные изменения. В связи с этим следует обращать внимание на используемый антикоагулянт, на точное соблюдение рекомендованного производителем объема образца, а также на тщательное и своевременное перемешивание пробы.

При централизации исследований взятие крови в наименьшей степени может контролироваться лабораторией. Зачастую выбор материала и места прокола осуществляется персоналом ЛПУ без учета требований лаборатории, что вынуждает отбраковывать часть образцов. В нашей лаборатории разработаны критерии отказа в проведении исследований в следующих случаях: взятый материал находится в несоответствующей пробирке (т. е. не с тем наполнителем); наличие сгустков в пробе с антикоагулянтами; несоответствие объема пробы (допускается отклонение +10%); гемолиз пробы (кроме исследований, на которые гемолиз влияния не оказывает); отсутствие штрих-кода на направлении или пробирке; отсутствие перечня исследований и т. д. Так как процедурная медицинская сестра не входит в штат лаборатории, а за конечный результат перед пациентом отвечает именно лаборатория, необходимо выработать четкие инструкции:

  • по выбору процедуры взятия крови (венозная или капиллярная);
  • по выбору медицинского инструментария для взятия крови (игла с определенным диаметром, ланцет с разным типом и глубиной прокалывающего устройства);
  • по выбору пробирок и микротейнеров с необходимым наполнителем;
  • по последовательности их наполнения.

Немаловажным считаем обучение медицинских сестер на курсах повышения квалификации приемам и правилам забора капиллярной и венозной крови с использованием вакуумных систем и микротейнеров, с последующей выдачей сертификата.

Соблюдение правил преаналитического этапа позволит свести к минимуму ошибки лабораторных исследований.

Таблица 1. Результаты сравнительного анализа гематологических показателей при взятии разного объема капиллярной крови в пробирки с К2ЭДТА

Объем пробы, рекомендованный производителем

2.1.2. Методы лабораторной и инструментальной диагностики

  • Листать назад Оглавление Листать вперед

    Методы исследования в медицине. Чувствительность и специфичность метода. Что такое скрининг-тест? Степень риска диагностической манипуляции. Обзор современных методов исследования и их диагностическая ценность. Диагностика по методу Фолля. Квантовая и биорезонансная диагностика.

    Современная медицина располагает большими возможностями для детального изучения строения и функционирования органов и систем, быстрой и точной диагностики каких-либо отклонений от нормы или заболеваний. Методы лабораторной диагностики в большей степени отражают проблемы на клеточном и субклеточном уровне (глава 1.4), но в то же время позволяют судить о “поломках” в конкретном органе. Чтобы увидеть, что происходит в данном органе, используют, в частности, инструментальные методы диагностики.

    Некоторые исследования применяют только для выявления тех или иных специфических заболеваний. Однако многие диагностические процедуры универсальны и используются врачами разных специальностей (глава 2.1). Для выявления заболеваний, симптомы которых еще не проявились или проявились слабо, проводят скрининг-тесты. Примером скрининг-теста является флюорография, позволяющая обнаружить болезни легких на ранних стадиях. Скрининг-тест должен быть точен, относительно недорог, а его проведение не должно вредить здоровью и сопровождаться сильными неприятными ощущениями для обследуемого. К скрининг-тестам можно отнести некоторые лабораторные методы диагностики – анализы крови и мочи. Самое распространенное исследование – клинический анализ крови, который является основным методом оценки форменных элементов крови. Кровь для исследования обычно получают из капилляров пальца. Кроме числа эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, определяют процентное содержание каждого вида лейкоцитов, содержание гемоглобина, размер и форму эритроцитов, число ретикулоцитов (незрелых эритроцитов, еще имеющих ядро). Клинический анализ крови (таблица 2.1.1) позволяет диагностировать большинство заболеваний крови (анемии, лейкозы и другие), а также оценить динамику воспалительного процесса, эффективность проводимого лечения, вовремя обнаружить развивающийся побочный эффект препарата.

    Таблица 2.1.1. Клинический анализ крови
    Показатель Что показывает Норма
    Гемоглобин Количество этого несущего кислород белка в эритроцитах Мужчины: 140-160 г/л
    Женщины: 120-140 г/л
    Число эритроцитов Число эритроцитов в указанном объеме крови Мужчины: 4-5·10 12 /л
    Женщины: 3,9-4,7·10 12 /л
    Гематокритное число Объемное соотношение плазмы крови и ее форменных элементов Мужчины: 42-50%
    Женщины: 38-47%
    Средний объем эритроцита Общий объем эритроцитов, деленный на их общую численность 86-98 мкм 3
    Число лейкоцитов Число лейкоцитов в указанном объеме крови 4-9·10 9 /л
    Лейкоцитарная формула Процентное соотношение лейкоцитов Сегментоядерные нейтрофилы: 47-72%
    Палочкоядерные нейтрофилы: 1-6%
    Лимфоциты: 19-37%
    Моноциты: 3-11%
    Эозинофилы: 0,5-5%
    Базофилы: 0-1%
    Число тромбоцитов Число тромбоцитов в указанном объеме крови 180-320·10 9 /л
    Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) Скорость, с которой эритроциты оседают на дно пробирки Мужчины: 2-10 мм/ч Женщины: 2-15 мм/ч
    Читайте также:
    Отмена дарения: что это такое, описание и особенности

    Биохимический анализ крови (таблица 2.1.2) позволяет оценить содержание в ней электролитов (ионов натрия, калия, хлоридов, бикарбонат-ионов и других), ферментов, характеризующих состояние того или иного органа (щелочная фосфатаза, аланинаминотрансфераза и другие). Во время исследования определяют количество белка, глюкозы и токсических продуктов обмена, которые в норме выводятся почками (креатинин, мочевина). Кровь для биохимического анализа получают из вены. Существует еще множество анализов крови, позволяющих контролировать состояние различных органов и систем, а также косвенно оценивать состояние организма в целом.

    Таблица 2.1.2. Биохимический анализ крови *

    Данные приведены из книги “Современная медицинская энциклопедия” под редакцией Р. Беркоу, 2001 г.

    относительное содержание:
    преальбумины
    альбумины
    альфа1-глобулины
    альфа2-глобулины
    бета-глобулины
    гамма-глобулины

    Проба жизнеспособности: что это такое, описание и особенности

    ГОСТ 27271-2014
    (ISO 9514:2005)

    Метод определения жизнеспособности многокомпонентных систем

    Paint materials. Method for determination of the pot life of multicomponent systems

    Дата введения 2015-09-01

    Цели, основные принципы и порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 “Межгосударственная система стандартизации. Основные положения” и ГОСТ 1.2-2009 “Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены”

    Сведения о стандарте

    1 ПОДГОТОВЛЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 195 “Материалы лакокрасочные”, ОАО “Научно-производственная фирма “Спектр ЛК” на основе аутентичного перевода на русский язык указанного в пункте 4 стандарта, который выполнен ФГУП “СТАНДАРТИНФОРМ”

    2 ВНЕСЕН Техническим секретариатом Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации

    3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 мая 2014 г. N 67-П)

    За принятие проголосовали:

    Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

    Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

    Минэкономики Республики Армения

    Госстандарт Республики Беларусь

    4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 сентября 2014 г. N 1166-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 27271-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 01 сентября 2015 г.

    5 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ISO 9514:2005* “Paints and varnishes – Determination of the pot life of multicomponent coating systems – Preparation and conditioning of samples and guidelines for testing” (Краски и лаки. Определение жизнеспособности многокомпонентных систем. Подготовка и кондиционирование образцов и руководящие положения по испытаниям) путем изменения его структуры для приведения в соответствие с правилами, установленными в ГОСТ 1.5 (подразделы 4.2 и 4.3).

    * Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. – Примечание изготовителя базы данных.

    Сравнение структуры настоящего стандарта со структурой указанного международного стандарта приведено в дополнительном приложении ДА.

    При этом дополнения и изменения, включенные в текст настоящего стандарта для учета потребностей национальной экономики и особенностей национальной стандартизации, выделены в тексте курсивом*.

    * В бумажном оригинале обозначения и номера стандартов и нормативных документов приводятся обычным шрифтом, отмеченные по тексту документа знаком “**” выделены курсивом. – Примечания изготовителя базы данных.

    Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5-2001.

    Настоящий стандарт разработан на основе ГОСТ Р 53653-2009 (ИСО 9514:2002) “Материалы лакокрасочные. Метод определения жизнеспособности многокомпонентных систем”.

    Международный стандарт разработан Комитетом по стандартизации ТС 35 “Paints and varnishes”.

    Перевод с английского языка (en).

    Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, имеются в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.

    Степень соответствия – модифицированная (MOD)

    Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе “Национальные стандарты”, а текст изменений и поправок – в ежемесячном информационном указателе “Национальные стандарты”. В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе “Национальные стандарты”. Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования – на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

    1 Область применения

    Настоящий стандарт распространяется на лакокрасочные материалы (ЛКМ), состоящие из нескольких компонентов, которые хранят отдельно и смешивают перед применением, и устанавливает метод определения срока их жизнеспособности после смешения компонентов путем определения конкретного(ых) показателя(ей) в лабораторных условиях.

    Определение жизнеспособности по настоящему методу проводят двумя способами:

    – по схеме проходит/не проходит, когда определяют конкретный(е) показатель(и) через установленный период времени;

    – как определение жизнеспособности путем повторного определения конкретного(ых) показателя(ей) через установленные промежутки (интервалы) времени.

    Настоящий стандарт не распространяется на быстро отверждающиеся (менее 15 мин) ЛКМ.

    Настоящий стандарт не предназначен для определения жизнеспособности ЛКМ в процессе их нанесения.

    Специальные системы, которые наносят при низких температурах, следует испытывать при наиболее низкой согласованной(ых) температуре(ах) для моделирования условий, при которых они будут использоваться на практике.

    Читайте также:
    Недвижимое имущество: что это такое, описание и особенности

    2 Нормативные ссылки

    В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

    ГОСТ 9.403-80** Единая система защиты от коррозии и старения. Покрытия лакокрасочные. Методы испытаний на стойкость к статическому воздействию жидкостей

    ГОСТ 896-69** Материалы лакокрасочные. Фотоэлектрический метод определения блеска

    ГОСТ 8420-74** Материалы лакокрасочные. Методы определения условной вязкости

    ГОСТ 9980.2-86 (ИСО 842-84, ИСО 1512-74, ИСО 1513-80) Материалы лакокрасочные. Отбор проб для испытаний (ИСО 842-84 “Сырье для изготовления лаков и красок. Отбор проб”, MOD; ИСО 1512-74 “Краски и лаки. Отбор проб”, MOD; ИСО 1513-1980 “Краски и лаки. Контроль и подготовка проб для испытаний”, MOD)

    ГОСТ 15140-78* Материалы лакокрасочные. Методы определения адгезии

    ГОСТ 22181-91* (ИСО 2535-74) Смолы полиэфирные ненасыщенные. Методы определения времени желатинизации (ИСО 2535-1974, MOD)

    ГОСТ 27890-88 (ИСО 4624-78) Покрытия лакокрасочные защитные дезактивируемые. Метод определения адгезионной прочности нормальным отрывом (ИСО 4624-1978 “Краски и лаки. Определение адгезии методом отрыва”, MOD)

    ГОСТ 29317-92 (ИСО 3270-1984) Материалы лакокрасочные и сырье для них. Температуры и влажности для кондиционирования и испытания (ИСО 3270:1984 “Краски, лаки и сырье для них. Температуры и влажности для кондиционирования и испытания”, MOD)

    ГОСТ 31975-2013 (ISO 2813:1994) Материалы лакокрасочные. Метод определения блеска лакокрасочных покрытий, не обладающих металлическим эффектом, под углом 20°, 60° и 85° (ИСО 2813:1994 “Краски и лаки. Определение блеска лакокрасочных покрытий, не обладающих металлическим эффектом, под углом 20°, 60° и 85°”)

    ГОСТ 32299-2013 (ISO 4624-2002) Материалы лакокрасочные. Определения адгезии методом отрыва (ИСО 4624-2002 “Краски и лаки. Определение адгезии методом отрыва”, MOD)

    ГОСТ 31149 (ISO 2409:2013) Материалы лакокрасочные. Определение адгезии методом решетчатого надреза (ИСО 2409:2007 “Краски и лаки. Решетчатый надрез”, MOD)

    Примечание – При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования – на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю “Национальные стандарты”, который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя “Национальные стандарты” за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

    3 Термины и определения

    В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

    3.1 жизнеспособность лакокрасочного материала: Максимальное время, в течение которого лакокрасочный материал, выпускаемый в виде отдельных компонентов, может быть использован после смешения компонентов.

    [ГОСТ 28246-2005*, статья 46]

    ________________
    * Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ 28246-2006. – Примечание изготовителя базы данных.

    4 Необходимая дополнительная информация

    Для метода, установленного в настоящем стандарте, необходима дополнительная информация. Перечень дополнительной информации приведен в приложении А.

    5 Аппаратура

    Обычное лабораторное оборудование и стеклянная посуда, а также:

    5.1 Сосуды с широким горлом с герметически закрывающейся крышкой, объемом примерно 500 см , имеющие размеры, при которых высота составляет 1-1,5 диаметра.

    5.2 Мерные сосуды объемом не более 500 см .

    5.3 Термостат, способный поддерживать температуру в пределах ±2°С.

    5.4 Термометр, обеспечивающий точность измерений до 0,2°С.

    5.5 Аппаратура для измерения согласованных показателей должна соответствовать аппаратуре, указанной в нормативных документах (НД) на соответствующие методы испытаний.

    6 Отбор проб

    Отбирают среднюю пробу каждого ЛКМ в соответствии с ГОСТ 9980.2.

    Контроль и подготовка каждой пробы для испытания – по ГОСТ 9980.2.

    7 Подготовка к испытаниям

    7.1 Для проведения испытаний готовят две параллельные пробы.

    7.2 Компоненты жидких систем ЛКМ кондиционируют отдельно в соответствии с ГОСТ 29317. После кондиционирования при стандартной или согласованной температуре значения температур компонентов не должны отличаться более чем на 1°С.

    7.3 Фиксируют время и смешивают компоненты. Соотношение компонентов (по весу или объему), количество, порядок смешивания, а также объем смеси, необходимый для испытаний, должны соответствовать указанным в НД или технической документации (ТД) на ЛКМ и быть отражены в протоколе испытаний [перечисления а) и б), приложение А].

    Во время смешивания второй, третий и последующие компоненты (в том числе и разбавитель, если он предусмотрен) наливают в сосуд небольшими порциями при постоянном перемешивании стеклянной палочкой. После добавления последней порции смесь тщательно гомогенизируют.

    Общая продолжительность смешивания во избежание потерь летучих веществ не должна превышать 3 мин.

    7.4 Если необходимо оценить свойства материала при окрашивании, следует подготовить объем смеси, приблизительно равный объему ЛКМ, необходимому для окрашивания. Например, при безвоздушном распылении минимальный объем должен составлять 5 дм .

    Использование ультразвуковой допплерографии для определения жизнеспособности потемневшего зуба после травматического повреждения: перспективы и ограничения

    Yong-Wook Cho, Sung-Ho Park

    Когда зуб обесцвечивается и не реагирует на холодовой тест или электроодонтодиагностику (ЭОД) после травматического повреждения, его диагностика может быть затруднена из-за отсутствия надлежащих методов диагностики для оценки его жизнеспособности. В данных отчетах о применении мы надеемся продемонстрировать, что ультразвуковая допплерография может успешно использоваться для оценки жизнеспособности зуба после травмы и поможет сократить применение ненужных эндодонтических методов лечения. Во всех трех описанных случаях зубы изменили цвет после травматических повреждений и показали отрицательную реакцию на холодовой тест и ЭОД. Тем не менее, они показали характерные реакции жизнеспособности при ультразвуковом допплеровском исследовании в течение всего периода наблюдения. В первом случае цвет зуба нормализовался, зуб показал положительную реакцию на холодовой тест и ЭОД через 10 недель после травмы. Во втором случае цвет зуба вернулся к своему нормальному оттенку через 10 недель после травматического повреждения, но остался нечувствительным к холодовому тесту и ЭОД. В третьем случае изменение цвета было успешно вылечено путем отбеливания здорового зуба.

    Читайте также:
    Опционный заем: что это такое, описание и особенности

    Введение

    Жизнеспособность зуба определяется с помощью холодового теста, электроодонтодиагностики (ЭОД), рентгенографического исследования или клинических признаков, таких как изменение цвета зуба. Тем не менее, жизнеспособность зуба можно оценить более точно по кровоснабжению в пульпе по сравнению с другими тестами, такими как холодовой тест и ЭОД, которые фактически оценивают чувствительность нервов. Когда зуб подвергается травматическом повреждению, оценка его жизнеспособности затрудняется, так как зуб иногда не реагируют на холодовой тест или ЭОД из-за пониженной проводимости чувствительных нервов или нервных окончаний. Такая сниженная реакция, по всей видимости, связана с повреждением, воспалением, сжатием или напряженным состоянием апикальных нервных волокон, для возвращения к нормальному функционированию которых требуется приблизительно 8 недель или более.

    Изменение цвета зуба может быть вызвано травматическим повреждением. Когда зуб изменяет цвет и не реагирует на холодовой тест или ЭОД после травматического повреждения, его диагностика может быть еще более сложной из-за отсутствия надлежащих методов диагностики для оценки его жизнеспособности. Зуб измененного цвета может полностью или частично вернуться к первоначальному оттенку и полупрозрачности, когда сохраняется его жизнеспособность. Мальгрен и Хюбель сообщили, что цвет был восстановлен в течение 4-6 месяцев у восьми из девяти постоянных зубов с переломом корня и изменением цвета после травмы. Они сообщили, что все зубы восстановили свою нормальную чувствительность после восстановления цвета. Также было описано временное изменение цвета в связи с временным апикальным повреждением (TAB) после вывихов постоянных зубов. Изменение цвета и потеря электрометрической чувствительности нормализовалась, когда появились радиографические данные об устранении TAB. Теме не менее, обычно требуется много времени для подтверждения такого устранения.

    Ультразвуковая допплерография использовалась во многих областях медицины в качестве неинвазивного и безрадиационного метода для оценки кровотока в микрососудистых системах. С недавнего времени ультразвук также начали применять в стоматологии. Некоторые исследования показали, что ультразвуковая допплерография предоставляет достаточно информации о микрососудистой системе для лечения зубов.

    Недавно Юун и соавторы сообщили, что ультразвуковая допплерография может эффективно использоваться для оценки кровотока в полости пульпы. Они сообщили, что с ее помощью можно измерить снижение скорости кровотока после местной анестезирующей инъекции, содержащей 1:80 000 адреналина. Они также указали на возможность эффективного использования допплеровской системы в диагностике травматических повреждений.

    В данной статье представлены три случая, наблюдаемые в течение последних двух лет на Кафедре консервативной стоматологии стоматологической клиники при Университете Йонсей, Сеул, Корея. Вначале у всех трех зубов наблюдалось изменение цвета после травматического повреждения и отрицательная реакция на температурные тесты и ЭОД, но при этом наблюдалась характерная реакция жизнеспособности при исследовании с помощью прибора ультразвуковой допплерографии (MM-Д-K, «Минимакс», Москва, Россия). В первом и втором случаях цвет зубов нормализовался через 10 недель после травмы. В третьем случае изменение цвета зуба было успешно вылечено путем отбеливания. В данном исследовании серии случаев мы надеемся продемонстрировать, что ультразвуковая допплерография может успешно использоваться для оценки жизнеспособности зуба после травмы и поможет сократить применение ненужных эндодонтических методов лечения.

    Описание клинических случаев:

    Случай 1

    47-летняя пациентка обратилась в наше отделение после травматического повреждения верхнего правого бокового резца (зуб № 12). Травма наступила за 3 дня до обращения в нашу клинику вследствие удара кулаком по лицу. Зуб 12 был вывихнут и показал положительную реакцию при перкуссии. Зуб не показал никакой реакции на холодовой тест или ЭОД. Был поставлен диагноз подвывиха, и мы решили подождать и понаблюдать за развитием травмы. Не наблюдалось никакого дискомфорта в течение 2 недель после травмы, при этом не было реакции на температурный тест или ЭОД, а также наблюдалось красноватое изменение цвета (рисунок 1a).

    Через 6 недель после травмы у пациентки отсутствовал дискомфорт, но продолжалось изменение цвета и зуб не реагировал на холод или ЭОД. Мы решили использовать прибор для ультразвуковой допплерографии для оценки жизнеспособности пульпы, результат показан на рисунке 1b. Зуб 12 показал типичное пульсирующее изображение, которое представляет собой нормальную жизнеспособную пульпу (рис. 1b). Мы разъяснили результаты и последствия теста пациентке. Мы решили продолжать ждать и наблюдать за зубом, так как пациентка не испытывала никакого дискомфорта, на тот момент ее не беспокоило изменение цвета, и она была готова подождать, чтобы определить, сможет ли зуб восстановиться до нормального состояния без какого-либо лечения. Через 10 недель после травмы зуб приобрел нормальный оттенок и восстановил свои нормальные реакции на холодовой тест и ЭОД (рисунок 1c).

    Рисунок 1. (a) В случае 1 изменение цвета зуба № 12 наблюдалось через 2 недели после травмы; (b) результат ультразвукового допплеровского исследования через 6 недель после травмы. Наблюдается типичное пульсирующее изображение, что представляет собой нормальную жизнеспособную пульпу; (c) Через 10 недель после травмы зуб приобрел нормальный оттенок.

    Случай 2

    30-летняя пациентка обратилась в нашу клинику для дальнейшего лечения травмированных передних зубов. Она получила травму при падении 2 недели назад и посетила местную клинику сразу после травмы. Смещенный зуб № 21 был шинирован с помощью композитной смолы и проволоки от зуба № 13 до зуба № 23, а затем местный дантист направил ее в нашу клинику. На периапическом рентгенографическом изображении корневая и периапикальная области были нормальными (рис. 2а). Зуб №21 показал отрицательные реакции при температурном тесте и ЭОД, положительную реакцию на перкуссию, и розоватое изменение цвета (рисунок 2б). Другие зубы показали нормальные реакции во всех тестах. В ультразвуковом допплеровском исследовании зуб №21 показал нормальную пульсирующую реакцию как у других зубов, кроме того мы услышали ритм пульсации из динамика (рисунок 2в). Через 4 недели после травмы зуб № 21 снова показал нормальную реакцию на перкуссию. В других тестах результаты были такими же, как и при предыдущем визите. Через 6 недель после травмы зуб № 21 по-прежнему демонстрировал розоватое изменение цвета и отрицательные реакции на температурный тест и ЭОД. Через 10 недель после травмы оттенок зуба № 21 вернулся к норме (рисунок 2г). Через 12, 16, 20 и 24 недели после травмы пациентка вообще не испытывала никакого дискомфорта. В ультразвуковом допплеровском исследовании зуб № 21 показал жизнеспособную реакцию, но он не реагировал на холодовой тест или ЭОД. На периапикальном изображении корневая и периапикальная области находились в нормальном диапазоне. Отрицательная реакция сохранялась на протяжении всего периода наблюдения в течение 9 месяцев. На тот момент пациентка была беременна и хотела отложить свой следующий визит до родов.

    Читайте также:
    Нотариальная деятельность: что это такое, описание и особенности

    Рисунок 2. (а) В случае 2 зуб № 21 был шинирован в местной клинике после подвывиха, произошедшего за две недели до того, как пациентка обратилась в нашу клинику. Зуб показал отрицательную реакцию на температурный тест и ЭОД и положительную реакцию на перкуссию (b) Зуб № 21 показал розоватое изменение цвета; (c) В ходе ультразвукового допплеровского исследования зуб №21 показал нормальную пульсирующую реакцию, как у других зубов; (d) Через 10 недель после травмы оттенок зуба № 21 пришел в норму.

    Случай 3

    22-летняя пациентка обратилась в наше отделение для отбеливания зубов. Она считала, что ее зубы желтоваты, и особенно она была недовольна оттенком зуба № 11, у которого наблюдалось желтовато-коричневое изменение цвета (рисунок За). Она сообщила о травме передних зубов в начальной школе. Пациентка проходила ортодонтическое лечение примерно за 7 лет до обращения. Однако она не знала точно, когда зуб № 11 начал изменять цвет. На рентгенограмме пространство корональной пульпы было облитерировано, но пространство пульпы присутствовало в области корня. Не было радиолюминесценции в периапикальнй области, но вершина корня была слегка укорочена (рисунок 3б). В холодовом тесте зуб № 11 не показывал никакой реакции, хотя иногда пациентка показывала отсроченную реакцию. Зуб не реагировал на ЭОД. В ходе ультразвукового допплеровского исследования зуб № 11 показал изображение и звук, характерные для жизнеспособного зуба (рисунок 3в). Мы решили сначала провести витальное отбеливание зубов, а затем повторно проверить цвет, чтобы решить, необходимо ли проводить восстановительную терапию. Было начато домашнее отбеливание с использованием 15%-ного пероксида карбамида (Opalescence, Ultradent, Саут-Джордан, штат Юта, США). Дополнительное домашнее отбеливание продолжалось только для зуба №11 после того, как пациентка была удовлетворена оттенком других зубов. Спустя примерно 2 месяца отбеливания она была удовлетворена оттенком зуба № 11 и не нуждалась в дальнейшем лечении (рисунок 3г).

    Рисунок 3. (а) В случае 3 наблюдалось желтовато-коричневое изменение цвета зуба № 11; (b) Пространство коронковой пульпы было облитерировано, тогда как пульповое пространство присутствовало в области корня. Не наблюдалось радиолюминесценции в периапикальной области, но вершина корня была слегка укорочена; (c) В ультразвуковом допплеровском исследовании зуб №11 показал изображение, типичное для здорового зуба; (d) Пациентка была удовлетворена оттенком зуба №11 после витального отбеливания.

    Обсуждение

    Розовое изменение цвета, которое может произойти в течение 2 – 3 дней после травматического повреждения, вызвано разрывом капилляров и высвобождением эритроцитов в полость пульпы. Гемолиз приводит к диффузии гемоглобина в зубные канальцы, вследствие чего цвет зуба может изменяться от розоватого до серовато-синего. Может возникать некоторое затухание серо-голубого оттенка, когда сохраняется кровоснабжение пульпы и пульпа выживает.

    В первом случае ультразвуковая допплерография показала типичное пульсирующее изображение, когда зуб не реагировал на холодовой тест и ЭОД на ранней стадии после травматического повреждения. В ходе наблюдения допплеровское исследование продолжало демонстрировать жизнеспособное изображение, но зуб все еще не реагировал на два других теста. Зуб восстановил свой оттенок через 10 недель после травматического повреждения, а его реакция на холодовой тест и ЭОД нормализовалась. Данное наблюдение согласуется с предыдущими отчетами, в которых указывалось, что цвет нормализовался, когда зубы восстанавливали свою жизнеспособность, и демонстрирует, что ультразвуковая допплерография может успешно применяться для определения жизнеспособности зубов в период, когда они не реагируют на холодовой тест и ЭОД после травматического повреждения. Ультразвуковая допплерография может помочь сократить применение ненужных эндодонтических процедур, которые могут применяться из-за отсутствия надлежащих методов диагностики после травматического повреждения.

    В первом и втором случаях потребовалось 10 недель, чтобы восстановить цвет зуба и реакции на холодовой тест и ЭОД. Данный результат согласуется с предыдущим исследованием, в котором цвет был восстановлен в течение 4-6 месяцев после перелома корня, что привело к изменению цвета зубов после травмы. Второй случай был интересен тем, что цвет вернулся к норме через 10 недель после травмы, но зуб не реагировал на холодовой тест и ЭОД даже через 9 месяцев после травматического повреждения, хотя с самого начала зуб демонстрировал стабильное жизнеспособное изображение при допплеровском исследовании. Ложноположительные реакции в ультразвуковом допплеровском исследовании пока не изучены. В настоящем исследовании использовался ультразвуковой допплеровский зонд с частотой 20 МГц. Частота ультразвука очень важна, поскольку она определяет глубину проникновения ультразвуковой волны. Несмотря на то, что сообщалось об эффективном проникновении в эмаль и дентин на частоте 20 МГц и определении кровотока в пульповых пространствах, можно было бы определить кровоток вне пульпового пространства, если толщина твердой ткани очень тонкая. Потенциал ложно положительных реакций при использовании ультразвукового допплеровского зонда требует дальнейшего изучения. Во втором случае для проверки реального сохранения жизнеспособности, которое может быть подтверждено положительной реакцией на холодовой тест и ЭОД, необходимо длительное наблюдение. Тем не менее, в данном случае зуб вернулся к своему нормальному оттенку через 10 недель после травматического повреждения, что свидетельствует о сохранении кровоснабжения и выживании пульпы. Для восстановления нервного волокна может потребоваться больше времени. Для определения того, являются ли результаты теста истинными или ложноположительными, требуется дальнейшее наблюдение.

    Читайте также:
    Организованная группа: что это такое, описание и особенности

    В третьем случае пациентка не реагировала на холодовой тест и ЭОД, хотя иногда она проявляла неясную положительную отсроченную реакцию на холодовой тест. Холодовой тест зависит от гидродинамического движения жидкости в дентинных канальцах, что стимулирует А-волокна. Зубы с кальцинированным пульповым пространством могут иметь нормальную и здоровую пульпу, но холодовые раздражители не могут стимулировать нервные окончания из-за изолирующего эффекта более толстого слоя дентина, что является следствием образования вторичного и реактивного дентина. Эрманн сообщил, что ЭОД особенно эффективна для пожилых пациентов и зубов, которые имеют ограниченное движение жидкости через дентинные канальцы в результате уплотнения дентина и петрификации пульпового пространства, так как в этих ситуациях температурные тесты пульпы обычно не дают должного результата. Клейн сообщил, что пациентка вряд ли покажет реакцию на холодовой тест, но может дать реакцию при ЭОД, если пространство пульпы было значительно кальцинировано. В данном случае часто требовалось подавать больше электрического тока в пульпу, чтобы вызвать реакцию, так как наблюдалось увеличение слоя дентина и уменьшение полости пульпы или ее фиброз. В третьем случае зуб №11 был диагностирован как жизнеспособный зуб на основании результатов ультразвукового допплеровского исследования, поскольку он демонстрировал последовательный положительный признак в течение всего периода наблюдения. В данном случае пространство корональной пульпы было облитерировано, тогда как пространство пульпы присутствовало в области корня. Поскольку наконечник ультразвукового допплеровского зонда располагался апикально, была возможность определить кровоток в корневом канале. Кроме того, пациентка показала реакцию на холодовой тест, хотя реакция был отсроченной и непоследовательной. Для дальнейших исследований нам нужно больше случаев и исследований, связанных с применением ультразвуковой допплерографии.

    Другими методами оценки сосудистой массы пульпы являются лазерная допплерография и пульсоксиметрия. В лазерной допплерографии для передачи света в кровеносные сосуды пульпы через структуру зуба используется лазер, а в пульсоксиметрии для той же цели используется красный и инфракрасный световой луч. Тем не менее, изменение цвета, вызванное осаждением кровяных пигментов в травмированном зубе, может препятствовать проникновению света как при лазерной допплерографии, так и при пульсоксиметрии. Ультразвуковая волна, используемая в приборе ультразвуковой допплерографии, может определить кровоток независимо от изменения цвета коронки, поэтому данная процедура может быть более полезна при исследовании зубов с измененным цветом.

    Выводы

    Изменение цвета зубов после травматического повреждения было устранено, когда в ходе ультразвуковой допплерографии было получено типичное пульсирующее изображение, что означает нормальную жизнеспособную пульпу. Ультразвуковая допплерография может являться эффективным инструментом для оценки жизнеспособности зубов, когда холодовой тест и ЭОД дают недостаточно информации, особенно после травматического повреждения. Однако для повышения клинической надежности использование ультразвуковой допплерографии требует дальнейших исследований на потенциально ложно положительные и отрицательные реакции.

    Подтверждение

    Настоящий отчет о клинических случаях является частью исследования при поддержке Программы фундаментальных научных исследований Национального исследовательского фонда Кореи (NRF), финансируемого Министерством образования, науки и технологий (2011-0021235).

    Конфликт интересов: не сообщалось о потенциальном конфликте интересов в отношении данной статьи.

    Сравнение цитометрических методов оценки жизнеспособности нативных и криоконсервированных сперматозоидов человека

    • Авторы:Доценко А.А. 1 , Серебрякова М.К. 1 , Кудрявцев И.В. 1 , Сухачев А.Н. 1 , Полевщиков А.В. 1
    • Учреждения:
      1. Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Институт экспериментальной медицины»
    • Выпуск: Том 20, № 1 (2020)
    • Страницы: 83-92
    • Раздел:Новые технологии
    • URL:https://journals.eco-vector.com/MAJ/article/view/19286
    • DOI:https://doi.org/10.17816/MAJ19286

    Цитировать

    Полный текст

    • Аннотация
    • Полный текст
    • Об авторах
    • Список литературы
    • Статистика

    Аннотация

    Цель исследования заключалась в сопоставлении с использованием метода проточной цитометрии способности различных сред для криоконсервации сперматозоидов обеспечивать их жизнеспособность после размораживания и оценке возможности использования лектина луковиц нарцисса ложного (Narcissus pseudonarcissus) для определения жизнеспособности нативных и криоконсервированных сперматозоидов человека.

    Материалы и методы. Исcледовали эякулят 54 мужчин в возрасте от 26 до 47 лет, проходивших лечение по поводу бесплодия. Контролем служил нативный эякулят, который также использовали для процедуры экстракорпорального оплодотворения. Четыре параллельных образца замораживали с применением различных коммерческих сред. После хранения и размораживания жизнеспособность сперматозоидов оценивали методом проточной цитометрии с помощью трех витальных красителей и меченого лектина луковиц нарцисса ложного.

    Результаты. Все красители показали, что криоконсервация приводит к двукратному снижению жизнеспособности сперматозоидов, причиной которого является изменение состава и свойств поверхностного аппарата клетки, снижение потенциала ее митохондрии, повреждение акросомального комплекса и ядра. Наименьшее снижение жизнеспособности сперматозоидов было отмечено для усовершенствованной для заморозки спермы среды Квина.

    Читайте также:
    Муниципальная должность: что это такое, описание и особенности

    Заключение. Проточная цитометрия позволяет с высокой эффективностью оценить жизнеспособность сперматозоидов в рамках проведения экстракорпорального оплодотворения. Результаты оценки жизнеспособности, полученные с применением лектина нарцисса, позволяют наиболее точно предсказать результат экстракорпорального оплодотворения.

    Ключевые слова

    Полный текст

    Введение

    Проблема бесплодного брака становится все более актуальной в России и во всем мире. Доля мужского фактора в бесплодном браке на сегодняшний день составляет не менее 40 %. Причинами мужского бесплодия могут быть нарушения морфологии, подвижности и, как результат, оплодотворяющей способности сперматозоидов. Период жизнеспособности сперматозоидов в женском репродуктивном тракте, по разным оценкам, может достигать 3–5 дней, но оплодотворяющая способность сохраняется от нескольких часов до 1–2 дней [1]. Тем не менее именно жизнеспособность сперматозоидов зачастую определяет выбор тактики лечения мужского фактора бесплодия. Ее определение представляется наиболее значимым в случае пациентов, у которых доля прогрессивно-подвижных форм составляет менее 32 %, а также при тяжелых формах бесплодия и необходимости криоконсервации биоматериала. Важность криоконсервации обусловлена как протоколом процедуры экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), так и возрастом, состоянием здоровья пациентов, отсутствием гарантий оплодотворения и имплантации бластоцисты и другими возможными рисками, что приводит к необходимости подбора оптимальной среды для криоконсервации сперматозоидов. В свою очередь, криоконсервация сопровождается заметным снижением жизнеспособности и оплодотворяющей способности мужских гамет, что актуализирует задачу оценки жизнеспособности сперматозоидов.

    В клинической практике для оценки жизнеспособности сперматозоидов человека принято придерживаться методов, рекомендуемых Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) и основанных на оценке целостности мембраны сперматозоида [2].

    Чаще других используют методы, предусматривающие окрашивание внутриклеточных структур водорастворимыми красителями, либо учитывающие изменение формы и объема клетки вследствие проникновения в нее воды. Водорастворимые красители плохо проникают через мембраны неповрежденных клеток, поэтому слабо окрашивают внутриклеточные структуры. Повышение проницаемости плазмалеммы приводит к усилению окрашивания и указывает на возможное повреждение сперматозоидов. На этом феномене основаны методы определения жизнеспособности клеток с помощью эозина, нейтрального синего и других водорастворимых красителей [2]. Этот простой и быстрый подход допускает различные модификации. Так, при одношаговом окрашивании эозин – нигрозином для окрашивания цитоплазмы используют эозин, а для увеличения контрастности между основным фоном и головками сперматозоидов — нигрозин. Это помогает визуализировать отдельные клетки. Метод также позволяет хранить предметные стекла для повторной оценки и контроля качества [3]. При этом некоторые коммерческие растворы эозина являются водными (гипотоническими) растворами, что негативно влияет на сперматозоиды, приводит к быстрому снижению жизнеспособности клеток и ложным результатам [4].

    Альтернативу методам окрашивания водорастворимыми красителями для определения жизнеспособности сперматозоидов составляет тест гипоосмотического набухания клеток (HOS-тест) [5]. Этот метод основан на том, что сперматозоиды с неповрежденными мембранами набухают в течение 5 мин в гипоосмотическом растворе NaCl, а жгутики стабилизируются (выпрямляются) через 30 мин инкубации [6]. Данный подход полезен, когда необходимо избежать окрашивания, например, в ходе отбора сперматозоидов для проведения интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов в ооцит (процедура ICSI). При данном подходе степень набухания клетки оценивают субъективно, влажные препараты не могут храниться, что делает невозможным сравнение результатов даже для одного пациента.

    Недостаток обоих методов заключается в визуальной оценке препарата и подсчете доли жизнеспособных сперматозоидов, что вносит субъективность в интерпретацию результатов и указывает на необходимость разработки современных автоматизированных и воспроизводимых методов.

    Принципиально иным подходом представляется использование проточной цитометрии, ставшей одним из наиболее распространенных методов работы с клетками как в фундаментальных, так и в прикладных исследованиях. Помимо высокой скорости исследования, преимуществами цитометрического анализа являются минимальный расход материала, возможность идентификации «чистой» (до 99,9 %) популяции, позитивной по тому или иному маркеру, одновременный анализ нескольких признаков и маркеров по любому числу событий, вплоть до единичных клеток. При определении жизнеспособности сперматозоидов с помощью проточной цитометрии можно одновременно учитывать как проницаемость плазмалеммы, так и состояние внутренних мембран, что позволяет параллельно оценивать митохондриальный потенциал, статус капацитации и акросомальной реакции [7].

    Повышение проницаемости плазмалеммы в любом случае сопряжено с изменением ее состава и частичной десиализацией, что открывает для анализа ранее скрытые детерминанты белковой и углеводной природы. Удобными инструментами для анализа углеводов гликокаликса являются лектины — углевод-связывающие белки с фиксированной лигандной специфичностью. Это определяет активное применение лектиногистохимии для изучения углеводных детерминант на поверхности клеток. Кроме того, возможно использование лектинов, конъюгированных с биотином и различными флуорохромами, в проточной цитометрии. Ранее лектины уже применяли для оценки апоптоза и связанных с ним изменений уровня различных углеводных детерминант на мембране на его разных стадиях [8, 9].

    В предварительных исследованиях были выявлены важные свойства лектина луковиц нарцисса ложного (Narcissus pseudonarcissus — NPA), который связывает остатки маннозы в терминальном положении на поверхности клеток, что указывает на перспективность его использования для детекции апоптоза [9].

    Цель данной работы заключалась в сопоставлении способности различных сред для криоконсервации сперматозоидов обеспечивать их жизнеспособность после размораживания и оценке возможности использования NPA для определения жизнеспособности нативных и криоконсервированных сперматозоидов человека методом проточной цитометрии.

    Материалы и методы

    Материал и его получение. В качестве материала использовали эякулят мужчин, проходивших лечение по поводу бесплодия в отделении вспомогательных репродуктивных технологий СПбГБУЗ «Городская Мариинская больница». В исследовании приняли участие 54 мужчины в возрасте от 26 до 47 лет, средний возраст составил 32,7 ± 0,7 года. От всех пациентов было получено осведомленное согласие. Стандартная подготовка перед получением материала включала 10-дневное исключение алкоголя, курения и тепловых процедур (бани, горячие ванны), а также 3-дневное половое воздержание. В исследование не включали пациентов, имевших эпизоды повышения температуры тела выше 37,3 °C в предшествующие 30 дней.

    Читайте также:
    Объект правоотношений: что это такое, описание и особенности

    Материал собирали в стерильные пластиковые контейнеры и сразу после получения для всех образцов эякулята оценивали показатели спермограммы, в том числе объем материала, концентрацию сперматозоидов, долю активно-подвижных форм и другие стандартные параметры спермограммы, с использованием световой микроскопии согласно рекомендациям ВОЗ [2].

    Полученный от каждого пациента материал разделяли на шесть аликвот. Нативный эякулят одной аликвоты (далее — «рабочая аликвота») подвергали стандартной обработке в рамках проведения процедуры ЭКО и использовали для оплодотворения ооцитов. После процедуры ЭКО эмбрионы переносили в полость матки женщины-реципиента, а о наступлении беременности судили по уровню хорионического гонадотропина человека (ХГЧ) в крови женщины на 10-е сутки после имплантации. Уровень ХГЧ определяли методом иммуноферментного анализа по методике изготовителя наборов (НПО «Иммунотэкс», Россия). Успехом процедуры ЭКО (то есть достоверным наступлением беременности) считали повышение уровня ХГЧ более 25 мМЕ/мл на 10-е сутки после ЭКО, хотя иногда беременность наступала и при более низких сывороточных концентрациях ХГЧ на указанном сроке.

    Материал аликвоты 1 (среда 1, контроль) также представлял собой нативный эякулят, который не подвергали процедуре замораживания, хранения и оттаивания, разбавляли равным объемом 0,14 М раствора натрия хлорида, забуференного фосфатами (pH 7,2–7,4, забуференный изотонический раствор натрия хлорида), и сперматозоиды отделяли от семенной плазмы путем центрифугирования при 200 g в течение 8 мин при комнатной температуре. Полученный осадок ресуспендировали в 200 мкл забуференного изотонического раствора натрия хлорида и использовали для цитометрического анализа.

    Материал аликвот 2–5 (среды 2–5) замораживали в жидком азоте после добавления равного объема консервирующей среды к нативному эякуляту с помощью коммерческих наборов для криоконсервации, процедуру которой осуществляли в соответствии с методикой изготовителей. Для аликвоты 2 использовали набор Sperm Freezing Medium, для аликвоты 3 — среду Квина, усовершенствованную для заморозки спермы, для аликвоты 4 — набор Freezing Medium, для аликвоты 5 — раствор Spermfreeze Solution. Замороженные порции эякулята хранили в жидком азоте от 1 до 30 сут, а после размораживания при комнатной температуре разбавляли равным объемом забуференного изотонического раствора натрия хлорида и готовили для цитометрического анализа аналогично среде 1.

    Подготовка проб для проточной цитометрии и проведение анализа. Для всех образцов, находившихся в средах 1–5, параллельно применяли четыре метода оценки жизнеспособности сперматозоидов.

    1. Для оценки мембранного потенциала митохондрий сперматозоидов, как самого раннего маркера апоптоза, использовали йодид 3,3´-дигексилоксакарбоцианина (DiOC6(3), Invitrogen, США). Метод окрашивания описан в работе [10]. Докрашивание иодистым пропидием и цитометрический анализ вели по методике, описанной I. Mindukshev et al. [11].
    2. Для оценки целостности мембраны и ДНК митохондрии сперматозоида и плотности упаковки его ядерного хроматина, позволяющего различить ранние и поздние стадии апоптоза, использовали краситель SYTO16 green (Invitrogen, США). Окрашивание данным красителем с последующим докрашиванием иодистым пропидием проводили в соответствии с методом, изложенным D. Wlodkowic et al. [12].
    3. Для дифференцировки раннего и позднего апоптоза сперматозоидов, а также окрашивания его митохондрий и акросомального аппарата применяли липофильный краситель родамин-123 (Rh123, Sigma-Aldrich, США) с последующим докрашиванием иодистым пропидием по методике И.В. Кудрявцева и др. [13].
    4. Новый способ определения жизнеспособности сперматозоидов с помощью меченного флуоресцеинизотиоцианатом лектина нарцисса (НПК «Лектинотест», Украина) защищен патентом РФ [14].

    Для всех красителей в ходе цитометрического исследования анализировали не менее 50 000 одиночных клеток. С целью разделения одиночных клеток и их агрегатов использовали сочетания сигналов по прямому (FS — величина, пропорциональная размеру клеток) и боковому (SS — величина, характеризующая структуру клеток) светорассеянию — интенсивность пикового против интенсивности интегрального сигналов по FS или SS, а также время прохождения через точку детекции против интенсивности интегрального сигнала FS или SS. Из-за неправильной формы сперматозоидов и возможного искажения результатов вследствие их случайной ориентации относительно лазерного луча в проточной ячейке в анализе использовали только одинаково ориентированные сперматозоиды, выделенные путем гейтирования. Результаты анализировали при помощи программного обеспечения Kaluza™ (Beckman Coulter, США).

    Статистическую обработку результатов проводили с помощью методов параметрического и непараметрического анализа в соответствии с результатами проверки сравниваемых совокупностей на нормальность распределения [15–18]. Накопление, корректировку, систематизацию исходной информации и визуализацию полученных результатов осуществляли с применением таблиц Microsoft Office Excel 2010. Статистический анализ проводили в программе IBM SPSS Statistics 20. В рамках параметрического анализа вычисляли средние арифметические и их ошибки (M ± m), а две выборки сравнивали с использованием t-критерия Стьюдента. В ходе непараметрического анализа в качестве показателя устойчивости результатов, выраженных количественными данными для сравниваемых объектов при различных условиях, рассчитывали коэффициент конкордации (множественной ранговой корреляции) W Кендалла, значения которого интерпретировали в соответствии со шкалой Чеддока [19]. Статистическую значимость полученного коэффициента конкордации W оценивали при помощи критерия χ 2 . Любые различия в рамках параметрического и непараметрического анализа считали достоверными при p >0,05

  • Рейтинг
    ( Пока оценок нет )
    Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
    Добавить комментарий

    ;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: